背景说明
基于DNA的合成原理,最初开发的工具是BrdU染色法,但其操作耗时长,往往需过夜处理细胞,操作繁杂,后来在BrdU的基础上,开发出了革命性的探针——EdU(5-Ethynyl-2’-deoxyuridine),这是一种胸腺嘧啶核苷类似物,其连有的炔烃团在天然化合物中很少见,能够在细胞增殖时期代替胸腺嘧啶掺入正在复制的DNA分子中。基于EdU与Apollo荧光染料(绿色、橙色、红色)的特异性反应,可直接快速、准确地检测细胞DNA的复制活性。
图 BrdU与EduU检测方法原理示意图
服务流程
体外实验
客户在线下单——订单/实验材料确认——细胞处理或组织切片——EdU孵育——固定、透化——EdU检测——DAPI或Hoechst 33342或抗体标记(可选)——可选荧光显微镜或激光共聚焦显微镜镜检、流式细胞术分析——EdU阳性细胞计数——出具实验报告——结果交付
体内实验
客户在线下单——订单/实验材料确认——体内直接注射EdU至相应组织——模型饲养——取相应组织进行组织切片——后续同体外实验
注:体内注射EdU后,也可进行活体示踪。
服务内容及说明
适用范围
EdU广泛应用于细胞增殖、细胞分化、生长与发育、DNA损伤修复、病毒复制、细胞标记示踪等方面的研究,尤其适合进行siRNA、miRNA、小分子化合物及其他药物的细胞增殖筛选实验。
客户下单及项目信息填写
在我司官网http://www.biorun.com/进行注册或登录,请客户按照页面提示填写项目名称、选择项目类型、填写个人信息及联系方式,提交项目所需要的具体信息,包括:
1、细胞类型与名称、模型种类与注射剂量;
2、检测时间节点;
3、尽可能丰富的相关资料、文献。
实验信息
实验过程中客户可以随时登入管理系统查看项目实时进展情况。实验结题时系统会通过短信自动通知客户,并发送实验报告查看网址。实验结题后,实验报告、检测结果可在线查看或打印,并永久保留。
实验周期
致电详询
实验交付内容
1、所有实验的原始数据(包括实验过程、实验试剂与设备等);
2、检测报告与结果分析(EdU荧光图、结果统计分析等);
3、具体实验报告。
EdU的优点
1、更简单:无需抗原抗体反应,基于小分子化学反应的检测方法简单高效,反应仅需要几分钟;
2、更灵敏:无需抗体,检测染料仅BrdU抗体的1/500,很容易扩散,即便是单个增殖细胞也能准确检测;
3、更快速:无需过夜,省却了抗原抗体反应的复杂繁琐步骤,完成整个检测周期仅需5h;
4、更准确:无需DNA变性(酸解、热解、酶解等),可有效避免变性带来的样品损伤,确保细胞核边缘清晰完整;
5、更兼容:对样品几乎无损伤,更容易与多种抗体或荧光蛋白同时标记,能够同时检测细胞其他性状特征;
6、多种染料可选,适用于各种动物细胞检测,对植物细胞亦适用。
文献示例
图 Edu法检测A549和PC9细胞的增殖情况(Yang et al., 2021)
参考文献
Cavanagh BL, Walker T, Norazit A, et al. Thymidine analogues for tracking DNA synthesis. Molecules. 2011;16(9):7980-7993.
Qu S, Jiao Z, Lu G, et al. PD-L1 lncRNA splice isoform promotes lung adenocarcinoma progression via enhancing c-Myc activity. Genome Biol. 2021 Apr 13;22(1):104.