背景说明
ChIP的原理是在生理状态下把细胞内的DNA与蛋白质交联在一起,通过超声或酶处理,将其随机切断为一定长度范围内的染色质小片段,利用抗原抗体的特异性识别反应,将与目的蛋白相结合的DNA片段沉淀下来,随后,特异性富集目的蛋白结合的DNA片段,通过对目的片段的纯化与检测,从而获得蛋白质与DNA相互作用的信息。
一旦完成染色质免疫沉淀,便可对纯化的染色质及有关蛋白、组蛋白、转录因子和辅因子进行多种下游分析。最常见的单基因分析和全基因组分析方法有ChIP-qPCR、ChIP-seq、ChIP-PCR、ChIP-芯片(ChIP-chip)检测等。
图 ChIP实验技术流程图(Giaimo et al., 2017)。
服务流程
客户在线下单——订单/实验材料确认——细胞固定——超声破碎——抗体孵育——与靶蛋白-DNA复合物结合——ProteinA结合抗体-靶蛋白-DNA复合物——复合物沉淀——洗脱——解交联——DNA纯化——鉴定(可选ChIP-qPCR、ChIP-seq、ChIP-PCR、ChIP-chip检测)——结果交付
服务内容及说明
适用范围
1、研究目的蛋白与已知靶序列间的相互作用;
2、研究目的蛋白与整个基因组未知序列的相互作用;
3、研究一个目的蛋白与DNA的相互作用;
4、研究两个蛋白与DNA共同结合的相互作用;
5、研究启动子区域的组蛋白的修饰;
6、研究结合在DNA序列上的蛋白复合物。
ChIP的优点
(1)可检测启动子DNA与其天然基因组状态下的转录因子间的相互作用;
(2)可检测组蛋白编码(即组蛋白乙酰化、三甲基化等)和离散染色质区域的转录因子翻译后修饰;
(3)可最大限度减少制备和沉淀过程中染色质重排的机会;
(4)基因特异性引物可用于后续PCR检测,特异性增加。
ChIP的缺点
(1)耗时较长,通常需要几天才能完成检测;
(2)存在抗体无效性。
客户下单及项目信息填写
在我司官网http://www.biorun.com/进行注册或登录,请客户按照页面提示填写项目名称、选择项目类型、填写个人信息及联系方式,提交项目所需要的具体信息,包括:
1、组织、细胞等样品、ChIP检测专用抗体(也可以选择由我司提供)及结合靶点等相关信息;
2、最终检测方式;
3、尽可能丰富的相关资料、文献。
实验信息
实验过程中客户可以随时登入管理系统查看项目实时进展情况。实验结题时系统会通过短信自动通知客户,并发送实验报告查看网址。实验结题后,实验报告,检测结果可在线查看或打印,并永久保留。
实验周期
致电详询
实验交付内容
1、所有实验的原始数据(包括实验过程、实验试剂与设备等);
2、ChIP电子图片及分析结果;
3、相互作用鉴定结果,可选ChIP-qPCR、ChIP-seq、ChIP-PCR和(或)ChIP-chip鉴定结果。
参考文献
Giaimo BD, Ferrante F, Borggrefe T. Chromatin Immunoprecipitation (ChIP) in Mouse T-cell Lines. J Vis Exp. 2017;(124):55907.