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参考文献

Sarkar P,Chattopadhyay A. Exploring membrane lipid and protein diffusion by FRAP[M]//Analysis of Membrane Lipids. New York, NY: Springer US,2020:119-141.

背景说明

荧光漂白后恢复技术（Fluorescence Recovery After Photobleaching，FRAP）是一种常用于活细胞研究的荧光动力学技术，其基本原理是在细胞内用强激光对特定区域的荧光分子进行局部漂白，使该区域荧光瞬间消失，随后通过监测未漂白分子从周围区域向漂白区的扩散与交换，记录荧光信号的恢复过程。具体原理可分为以下关键步骤：

1.在样品中表达或标记荧光分子（如GFP融合蛋白）;

2.用高强度激光对局部区域进行“光漂白”，使该区域荧光瞬间消失;

3.观察随时间推移，未漂白的荧光分子从周围区域扩散/转运进入漂白区;

4.记录荧光强度恢复曲线。

通过分析恢复曲线的速度和程度，FRAP可以定量反映分子的扩散速率、结合/解离动力学以及不可移动组分比例，从而揭示蛋白质或膜分子在细胞内的运动状态与相互作用特征。

该技术广泛应用于膜蛋白流动性分析、转录因子与染色质结合动力学、细胞骨架蛋白行为研究以及细胞内相分离体系的动态特性解析，是研究细胞内分子“动态行为”的重要工具之一。

图2. FRAP实验原理与荧光强度恢复曲线图（Sarkar et al., 2020）

服务内容及说明

适用范围

荧光漂白后恢复技术（Fluorescence Recovery After Photobleaching，FRAP）广泛应用于膜蛋白与膜脂的侧向扩散分析、转录因子及染色质结合蛋白在细胞核内的动态交换、细胞骨架（如actin、微管）组装与解聚过程，以及细胞内蛋白复合体或相分离结构的流动性研究。此外，FRAP也适用于评估蛋白–蛋白或蛋白–结构之间的结合稳定性，通过可移动组分比例反映分子是否被牢固“固定”在特定结构上。总体来说，只要体系中存在荧光标记分子并能进行局部光漂白与实时成像，且研究目标是分子扩散或结合动力学，FRAP都可以作为一种有效的分析手段。

技术优势

（1）活细胞实时检测：可在尽量接近生理状态下观察分子动态过程，无需固定或破坏细胞结构；

（2）原位分析能力强：能够在细胞特定区域（如膜、细胞核、胞质局部）进行定点研究，具有良好的空间分辨率；

（3）定量分析明确：可通过荧光恢复曲线获得扩散速率、结合/解离动力学以及可移动组分比例等关键参数；

（4）适用范围广：适用于膜蛋白、转录因子、细胞骨架蛋白以及相分离体系等多种生物学过程研究;

（5）动态信息丰富：能够揭示分子在细胞内的“运动状态”和“结合稳定性”，提供静态成像无法获得的信息。

客户下单及项目信息填写

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2、提交项目所需要的具体信息：细胞类型，荧光标记方式，蛋白定位。

实验信息

实验过程中客户可以随时登入管理系统查看项目实时进展情况。实验结题时系统会通过短信自动通知客户，并发送实验报告查看网址。实验结题后，实验报告、检测结果可在线查看或打印，并永久保留。

实验周期

致电详询

实验交付内容

1.荧光探针的染色图；

2.荧光强度实时监测数据；

3.结果报告。