背景说明

将外源基因导入细胞，并使其在细胞中表达的方式可分为两大类：

（1）瞬时表达（transient gene expression，TGE），即外源DNA/RNA不会整合到宿主染色体中，虽可达到高水平表达，但通常只持续几天，一般会在96h内失效；

（2）稳定表达（Stable gene expression，SGE），即外源DNA会整合到宿主细胞染色体上，使宿主细胞可长期表达目的基因。

稳转细胞系即稳定表达的细胞系指在细胞中能够持续、稳定表达某一特定基因的细胞系，如基因过表达、基因干扰。与瞬时转染相比，稳转细胞系弥补了瞬时感染（或转染）实验中外源基因表达时间短的缺陷，便于长期观察某特定基因对于细胞功能的影响及蛋白相互作用。

稳转细胞系包括多克隆稳转细胞系（即抗性基因筛选得到的细胞株）和单克隆稳转细胞株（从多克隆细胞中经细胞克隆挑选后，由一个细胞扩增得到的细胞系）。

多克隆稳转细胞系构建一般通过慢病毒感染来完成。慢病毒载体由转移质粒、包装质粒和包膜质粒组成，转移质粒携带目的基因和选择标记（如嘌呤霉素抗性基因），包装质粒提供病毒复制所需的酶，包膜质粒提供病毒外壳蛋白。通过共转染这些质粒到包装细胞（如HEK293T细胞）中，可以产生具有感染能力的慢病毒颗粒。将构建好的慢病毒液加入目标细胞中进行感染，感染后48-72小时，根据载体中的选择标记（如嘌呤霉素、潮霉素等）加入筛选药物，筛选出成功整合外源基因的多克隆稳转细胞系。

图 使用慢病毒生成多克隆稳转细胞系的示意图

服务内容及说明

适用范围

多克隆稳转细胞株适用于各种研究应用，如基因编辑、药物筛选与药理学研究、重组蛋白研发、抗体研发与生产、基因功能研究等场景。

客户下单及项目信息填写

在我司官网http://www.biorun.com/进行注册或登录，请客户按照页面提示填写：细胞名称、培养方式、转染要求、载体信息、抗性筛选等信息，细胞及载体可选自行提供或我司提供。

实验信息

实验过程中客户可以随时登入管理系统查看项目实时进展情况。实验结题时系统会通过短信自动通知客户，并发送实验报告查看网址。实验结题后，实验报告、检测结果可在线查看或打印，并永久保留。

实验周期

致电详询

实验交付内容

1、重组载体的图谱序列信息和注释信息；菌检电泳图；测序结果；一份去内毒素质粒,质量1μg；一份大肠杆菌菌液1mL（25%甘油菌）；超过部分额外收费。

2、a.稳转细胞株/系筛选出库细胞标准：一个T25/瓶，密度80%以上，状态照片采集10X，3张/株细胞；b.病毒空载细胞株需额外收费可提供（可选）；

3、病毒包装的完整的质检报告，默认包含无菌检验、支原体、衣原体检测、qPCR滴度检测，其他如内毒素残留、BSA残留，需额外收费（可选）

4、完整的实验数据及实验报告。

5、所有实验材料免费保存1个月，继续保存请提前沟通，需额外收费，否则逾期自动清理。