背景说明
细胞转染是指将外源分子（如DNA、RNA等）导入真核细胞的技术。目前，其已成为实验室工作中最常涉及的基本方法，是研究基因表达调控、突变分析等的常规工具。转染方法大致可分为物理介导（如电穿孔法、显微注射和基因枪等）、化学介导（脂质体及其代替物、磷酸钙等）和生物介导（各类病毒，包括腺病毒、慢病毒、逆转录病毒、腺相关病毒等）三类途径。
图 细胞转染原理
细胞转染又分为瞬时转染和稳定转染，瞬时转染是指外源基因进入受体细胞后，存在于游离的载体上，不整合到细胞的染色体上，基因表达维持时间较短，通常在96h以内；稳定转染是指DNA整合到宿主细胞的染色体中，使宿主细胞可长期表达目的基因。目前，大多采用依据不同质粒载体含有的抗性标志选用相应的抗生素对靶细胞进行筛选，常用的抗生素有嘌呤霉素（Puromycin）、G418（Geneticin）等。
图 细胞转染步骤
4种转染方法概述
电穿孔：通过高强度电场作用瞬时提高细胞膜通透性，从而吸收周围介质中的外源分子。
显微注射：采用管尖0.1-0.5μm的玻璃微量注射针将外源基因直接注射到细胞内。
脂质体转染：阳离子脂质体表面带正电荷，可与核酸磷酸根发生静电作用将DNA分子包裹入内，形成DNA脂复合体，从而被表面带负电的细胞膜吸附，再通过膜的融合或细胞内吞作用将DNA传递入细胞。
磷酸钙沉淀法：使DNA形成DNA-磷酸钙沉淀复合物，然后粘附到培养的哺乳动物细胞表面，从而迅速被细胞所捕获的方法。
表 转染方法比较
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转染方法 |
原理 |
应用 |
特点 |
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脂质体及其代替物 |
中性脂质体是利用脂质膜包裹DNA，借助脂质膜将DNA导入细胞膜内；带正电的阳离子脂质体，DNA并没有预先包埋在脂质体中，而是带负电的DNA自动结合到带正电的脂质体上，形成DNA-阳离子脂质体复合物，从而吸附到带负电的细胞膜表面，经过内吞被导入细胞。 |
瞬转/稳转 |
操作简单；重复性高；细胞毒性小；适用性广 |
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磷酸钙 |
磷酸钙DNA复合物西服细胞膜，被细胞内吞。 |
瞬转/稳转 |
实验条件严格；难度大；原代细胞不适用 |
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电穿孔 |
通过高强度的电场作用，瞬时提高细胞膜的通透性，促使细胞吸收周围介质中的外源分子。 |
瞬转 |
适用性广；细胞致死率高；载体及细胞用量大 |
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显微注射 |
利用超细针头将外源目的基因片段直接注入细胞核或细胞质。 |
瞬转/稳转 |
适用细胞种类少，技术复杂，设备昂贵 |
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病毒感染 |
携带目的基因片段的病毒感染目标细胞后，通过侵染宿主细胞将外源基因整合到染色体中。 |
瞬转/稳转 |
病毒包装难；感染效率高；用于难转细胞及原代、悬浮类细胞 |
服务流程
瞬时转染
客户在线下单——订单/实验材料确认——载体构建——细胞培养——调整细胞状态——细胞转染/病毒感染——转染/感染效率检测（检测时间点可选）——后续可选qRT-PCR、Western blot检测——出具实验报告——结果交付
稳定转染
客户在线下单——订单/实验材料确认——载体构建——细胞培养——调整细胞状态——细胞转染/病毒感染——目标基因表达初检（可选qRT-PCR、Western blot检测）——药物筛选——目标基因表达量检测（可选qRT-PCR、Western blot检测）——获取稳转细胞株——出具实验报告——结果交付
服务内容及说明
适用范围
功能基因的敲低/敲除与过表达，如：mRNA、lncRNA、microRNA、circRNA等。
客户下单及项目信息填写
在我司官网http://www.biorun.com/进行注册或登录，请客户按照页面提示填写：细胞名称、培养方式、转染要求、载体信息、抗性筛选等信息，细胞及载体可选自行提供或我司提供。
实验信息
实验过程中客户可以随时登入管理系统查看项目实时进展情况。实验结题时系统会通过短信自动通知客户，并发送实验报告查看网址。实验结题后，实验报告、检测结果可在线查看或打印，并永久保留。
实验周期
致电详询
实验交付内容
瞬时转染交付
1、实验原始数据；
2、质粒载体
1) 载体全序列信息和注释信息；
2) 载体的酶切图谱；
3) 载体的测序结果；
4) 一份质粒、一份大肠杆菌菌液；
3、转染效率结果
1) 针对带有荧光标记的转染物，提供阴性对照、阳性对照以及实验组的荧光图；
2) 根据客户要求提供qRT-PCR鉴定报告或Western blot鉴定报告。
稳定转染交付
1、实验原始数据；
2、质粒载体交付同瞬时转染；
3、转染效果鉴定
1）稳定转染鉴定结果；
2）根据客户要求提供qRT-PCR鉴定报告或Western blot鉴定报告。
4、稳定转染且验证达标后的细胞株以T25或冻存的细胞的形式寄出。
案例展示
图 我司各种细胞瞬时转染GFP后的48h转染效率
