背景说明

CETSA的原理建立在一个经典的生化概念之上：蛋白质与其配体（如药物）结合后，其热稳定性通常会发生改变。通俗的理解是：结合了药物的蛋白就像穿了“防弹衣”，在面对 热应激时，比没有“防弹衣”的蛋白更加稳定，更不容易受热变性沉淀。

其技术原理分步解析：

1.热变性与沉淀

蛋白质在加热到一定温度时会发生变性，其三维结构展开，内部的疏水区域暴露出来。变性的蛋白质会失去可溶性，相互聚集并从溶液中沉淀出来。变性和沉淀的蛋白在离心后位于沉淀中，而仍保持可溶性和天然结构的蛋白则在上清中。

2.配体结合的保护效应

当一个小分子药物（配体）与它的靶蛋白活性位点特异性结合时，这种结合行为就像“订书钉”一样，稳定了蛋白的三维结构，使其构象更紧固。这种“紧固”状态使得蛋白需要更高的能量（即更高的温度） 才会展开变性。因此，与药物结合的蛋白在给定的加热温度下，比未结合的蛋白更不容易变性沉淀。

3.检测与量化

通过检测在不同加热温度下（或同一温度下，不同药物处理）仍保持可溶的靶蛋白量，就可以判断药物是否与靶蛋白结合。通常使用Western Blot、免疫荧光或高通量质谱（用于发现未知靶点）来定量检测上清中剩余的天然靶蛋白的量。

图1 CETSA技术原理（Tu et al., 2023）。

服务内容及说明

适用范围

1、药物靶点验证与作用机制研究；

2、高通量药物筛选；

3、研究细胞信号通路与蛋白质功能。

客户下单及项目信息填写

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实验信息

实验过程中客户可以随时登入管理系统查看项目实时进展情况。实验结题时系统会通过短信自动通知客户，并发送实验报告查看网址。实验结题后，实验报告，检测结果可在线查看或打印，并永久保留。

实验周期

致电详询。

实验交付内容

1、蛋白的WB条带图；

2、完整的实验数据及实验报告。

案例展示

CETSA用于测定HSP70与Ver（一种药物）在不同时间药物暴露下的一系列温度范围内相互作用的热不稳定性。

图2 CETSA用于测定HSP70与Ver的热不稳定性。

参考文献

Tu Y, Tan L, Tao H, et al. CETSA and thermal proteome profiling strategies for target identification and drug discovery of natural products[J]. Phytomedicine, 2023, 116: 154862.