背景说明

传统的PPI检测方法如免疫共沉淀或Pull-down等技术通常在细胞提取物中进行，无法直接反映活细胞内的真实生理环境；而荧光互补技术（如BiFC）则需要自行构建标签蛋白，且背景信号较高。NanoBiT技术作为一种商品化的完整解决方案，克服了这些局限，能够在活细胞中实现对蛋白质相互作用的实时、动态监测。

NanoBiT系统的核心设计基于将 NanoLuc®萤光素酶人工拆分为两个亚基：

（1）大BiT（LgBiT）：约 17.6 kDa，作为结构稳定的融合伴侣。

（2）小BiT（SmBiT）：仅11个氨基酸的短肽，从肽库中专门筛选用于PPI检测。

LgBiT和SmBiT两个亚基分别与待测的两个目的蛋白融合表达。当这两个目的蛋白发生相互作用时，LgBiT与SmBiT被拉近并互补结合，形成具有活性的NanoLuc®萤光素酶。在底物呋喃嗪存在的情况下，该活性酶会催化底物产生明亮的生物发光信号。

服务内容及说明

适用范围

1、已知蛋白互作验证（替代 Co-IP，活细胞原位）；

2、药物调控蛋白互作筛选（PPI 靶点药物高通量筛选）；

3、病毒蛋白 - 宿主因子互作筛选。

技术优势

1、信噪比极高：室温下发光强度比传统 Split Fluc 技术高 100 倍，37℃ 下高 1000 倍；背景信号极低，信噪比和动态检测范围显著优于传统方法。

2、可实时动态检测：由于 LgBiT 与 SmBiT 的亲和力经过弱化设计（KD ≈ 190 μM），两者互补结合是可逆的，能够实时监测蛋白质相互作用的形成与解离过程。

3、位阻效应小：LgBiT（约 17.6 kDa）和 SmBiT（仅 11 个氨基酸）的分子量远小于常规荧光蛋白，对融合蛋白的空间结构和功能干扰更小。

4、检测通量灵活：兼容从手工操作到高通量筛选（HTS）的多种场景，最高可支持 1536 孔板检测。

5、无需裂解细胞：可对活细胞进行直接、实时的监测，更接近生理真实状态，保留了细胞环境和动态过程。

客户下单及项目信息填写

在我司官网http://www.biorun.com/进行注册或登录，请客户按照页面提示填写：细胞名称、培养方式、转染要求、载体信息、抗性筛选等信息，细胞及载体可选自行提供或我司提供。

实验信息

实验过程中客户可以随时登入管理系统查看项目实时进展情况。实验结题时系统会通过短信自动通知客户，并发送实验报告查看网址。实验结题后，实验报告、检测结果可在线查看或打印，并永久保留。

实验周期

致电详询

实验交付内容

1、载体图谱序列信息，菌检电泳图，测序结果；

2、一份质粒，一份大肠杆菌菌液；

3、完整的实验数据及实验报告。

案例展示

使用NanoBiT技术及生物发光显微镜对活细胞成像，显示LgBiT-VEGFR2与HiBiT-NRP1 互补产生的发光信号分布于细胞膜和胞内区域，证实两者在活细胞中形成复合物并定位于多个亚细胞位。

图 利用生物发光成像直接观察VEGFR2/NRP1 NanoBiT互补复合物在活细胞中的分布（Peach et al., 2020）。