背景说明

液-液相分离（Liquid-Liquid Phase Separation，LLPS）是指在细胞内某些生物大分子（如蛋白质和RNA）通过相互作用，形成具有不同组分和性质的相分离液滴。这些液滴类似于油滴在水中的分离状态，形成了细胞内的一种独特的亚结构，让蛋白质和RNA等生物大分子在细胞质中形成无数动态的“液滴”，成为调控生命活动的关键枢纽。LLPS是细胞组织无膜区室的普遍机制，用以解释胞内通过分子相分离，组织调控内部环境，形成无膜细胞器（如：核仁、miRISC、中心体、PML小体、应激颗粒、P颗粒、异染色质及突触的细胞骨架等）。生物大分子的相分离一般包含以下特点：

（1）分子由自由态转为聚合态，此过程动态可逆；

（2）相关蛋白具有高度保守的无规卷曲结构；

（3）存在精密的调控机制。

服务内容及说明

1、应用范围

（1）疾病机制研究

（2）药物递送系统

（3）基因表达调控

（4）DNA损伤修复研究

2、技术流程

（1）载体构建：详见网页版，如果无此步骤可忽略。需要详细的资料可以私信联系销售经理额外提供。

（2）细胞培养与转染：根据实验要求培养特定细胞类型，将表达质粒转染至细胞系。设置对照组和处理组，对照组为不含目的基因的质粒表达，处理组为上述融合蛋白的表达。

（3）相分离诱导：根据实验需求，将缓冲液和必要的辅助成分加入培养基，模拟细胞内环境或调节相分离条件。静置溶液，观察液滴形成过程，通常需要数分钟至数小时，具体时间取决于蛋白性质和实验条件。

（4）相分离现象观察与捕获：使用光学显微镜（如明场显微镜、荧光显微镜）观察液滴形态、大小、数量及分布情况。记录相分离现象，包括液滴形成时间、稳定性、融合或分裂行为等。若使用荧光标记蛋白，可通过荧光成像分析液滴内部蛋白分布和动态变化。

我司案例

FUS凝聚体经营光漂白后，荧光强度出现先迅速下降，随后快速恢复，最终趋于稳定的典型液滴状凝聚体恢复曲线特性，证实FUS凝聚体存在LLPS现象。

参考文献

[1] Wang B, Zhang L, Dai T, et al. Liquid–liquid phase separation in human health and diseases. Signal Transduction and Targeted Therapy, 2021, 6(1): 290.