背景说明

基因编辑是一种能改变生物体基因组序列的基因工程技术，主要通过人工核酸内切酶实现对基因组特定基因序列的敲除、插入或精确修饰。目前，基因编辑主要有三种方法：锌指核酸酶技术（ZFN）、转录激活效应因子核酸酶（TALEN）技术和CRISPR/Cas系统介导的基因编辑技术。进行基因编辑时，人工核酸内切酶能够识别并切断靶DNA序列，产生DNA双链断裂（Double-strand break，DSB），然后细胞会进行及时修复，主要有两种修复途径：非同源末端连接（Non-homologous end joining, NHEJ）和同源重组（Homologous directed repair, HDR）。通过NHEJ修复DSB时，细胞常会在断裂位点插入或删除几个碱基(indel)，快速将DNA连接起来，因此导致的基因序列变化而使修复后的基因突变，功能丧失，称之为基因敲除（Knock out，KO）。

图 CRISPR/Cas9基因编辑机制（Yanxin X et al.,2022）。

基因敲除是指使生物体基因组中的特定基因失活或失效的过程。通常是通过在靶基因中引入突变来实现的，使其失去功能。进行基因敲除的方法，包括同源重组、RNA干扰（RNAi）和CRISPR/Cas9。同源重组即通过引入修饰的DNA片段，用无功能或被破坏的版本替换靶基因；RNAi利用小RNA分子来沉默或降解靶基因的信使RNA（mRNA），阻止其翻译为蛋白质；CRISPR/Cas9是一种革命性的基因编辑工具，它使用引导RNA（sgRNA）和Cas9酶在基因组的特定位置引入靶向DNA断裂，导致基因破坏。

基于CRISPR/Cas9的基因敲除（KO）

原理：当Cas9内切酶切割双链DNA时，细胞自身启动更具优势的NHEJ修复途径，导致切割位点产生移码突变或片段缺失，从而造成基因沉默，功能丧失，实现基因敲除。

图 基于CRISPR/Cas9基因敲除的示意图（Petazzi P et al., 2020）。

服务内容及说明

客户下单及项目信息填写

在我司官网http://www.biorun.com/进行注册或登录，请客户按照页面提示填写：目的基因信息、载体构建详情，后续转染的细胞可选自行提供或我司提供。

实验信息

实验过程中客户可以随时登入管理系统查看项目实时进展情况。实验结题时系统会通过短信自动通知客户，并发送实验报告查看网址。实验结题后，实验报告、检测结果可在线查看或打印，并永久保留。

实验周期

致电详询

实验交付内容

1、所有实验的原始数据（包括实验过程、实验试剂与设备等）；

2、敲除载体：一份质粒、一份大肠杆菌菌液（25%甘油菌）；

3、敲除载体的全序列信息和注释信息；

4、敲除载体的酶切图谱；

5、敲除载体测序结果；

6、后续所有实验的相关结果（靶点三包一至少有效果）。