背景说明
甲基化特异性PCR（Methylation-specific PCR，MSP）
DNA经亚硫酸氢钠处理后，所有未发生甲基化的胞嘧啶被转化为尿嘧啶，而甲基化的胞嘧啶不变；基于这种碱基的改变，根据甲基化位点设计针对甲基化和非甲基化序列的引物进行PCR，最后，通过电泳检测MSP扩增产物，如果用针对处理后甲基化DNA链的引物能得到扩增片段，则说明该位点存在甲基化；反之，说明被检测的位点不存在甲基化。
图 MSP检测甲基化原理示意图
亚硫酸氢盐测序法（Bisulfite sequencing PCR，BSP）
结合重亚硫酸盐的测序法是一种灵敏的能直接检测分析基因组DNA甲基化模式的方法。重亚硫酸盐处理后，用针对改变后的DNA序列设计特异性引物并进行PCR，产物中原先非甲基化的胞嘧啶位点被胸腺嘧啶所替代，而甲基化的胞嘧啶位点保持不变。PCR产物克隆后进行测序。通过这个方法能得到特定位点在各个基因组DNA分子中的甲基化状态。
图 BSP检测甲基化原理示意图
高分辨率熔解曲线法（High Resolution Melting，HRM）
高分辨率熔解曲线法（High Resolution Melting，HRM）是近年来国外兴起的一种全新突变扫描和基因分型的遗传分析方法。其主要是依据DNA序列长度、GC含量、碱基互补性差异和特定饱和染料可插入DNA双链中的特性，在非CpG岛位置设计一对针对亚硫酸氢盐修饰后的DNA双链的引物，这对引物中间的片段包含感兴趣的CpG岛。若这些CpG岛发生了甲基化，用亚硫酸氢盐处理后，未甲基化的胞嘧啶经PCR扩增后转变成胸腺嘧啶，而甲基化的胞嘧啶不变，样品中的GC含量发生改变，从而导致熔解温度变化，应用高分辨率熔解曲线对样品进行分析，其分辨精度可达到对单个碱基差异的区分。
图 HRM检测甲基化原理示意图
表 三种甲基化检测方法比较
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检测方法 |
优点 |
缺点 |
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MSP |
灵敏度高；样品消耗少；可用于石蜡样本；快速、简单、省时 |
只能进行定性分析 |
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BSP |
可做定量研究；敏感性高，待测DNA中5’-甲基胞嘧啶分布极不均衡也可检测；引物设计相对简单 |
价格较高 |
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HRM |
简单、高效、快速、廉价；闭管操作，避免交叉污染，可发现未知突变 |
对于未知突变，不可判断其突变类型 |
服务流程
客户在线下单——订单/实验材料确认——基因组DNA提取并定量——亚硫酸氢钠修饰——DNA修饰纯化后回收——引物设计——PCR扩增——甲基化修饰检测（可选MSP、BSP、HRM等）——出具实验报告
服务内容及说明
适用范围
1、重编程：DNA甲基化是一个表观遗传过程。与直接从亲本遗传的DNA序列不同，从配子中提取的甲基化模式在胚胎植入前被删除，每个个体都建立了一个新的甲基化图谱。
2、衰老：甲基化事件在发育期间以高度特异性的方式发生，模拟分化组织的表达模式。甲基化变化是否会影响衰老过程还需进一步研究。
3、疾病：DNA甲基化也在几种人类疾病中起作用（如，脆性X综合征）。
4、环境：环境因素影响DNA甲基化状态，可能会影响长期基因表达模式。
5、诊断人类疾病：DNA甲基化的一个新兴且令人兴奋的临床应用是在诊断领域。
客户下单及项目信息填写
在我司官网http://www.biorun.com/进行注册或登录，请客户按照页面提示填写项目名称、选择项目类型、填写个人信息及联系方式，提交项目所需要的具体信息，包括：
1、检测方法；
2、待检样本名称、种属、指标、数量、来源等；
3、尽可能丰富的相关资料、文献。
实验信息
实验过程中客户可以随时登入管理系统查看项目实时进展情况。实验结题时系统会通过短信自动通知客户，并发送实验报告查看网址。实验结题后，实验报告、检测结果可在线查看或打印，并永久保留。
实验周期
致电详询
实验交付与标准
1、所有实验的原始数据（包括实验过程、实验试剂与设备等）；
2、检测结果分析报告；
3、具体实验报告。
