背景说明

蛋白质与小分子之间的相互作用在生物学研究和药物开发中至关重要，而常用的研究方法包括SPR、BLI和ITC等技术，但基本都是纯体外实验、通量低、仪器昂贵、操作复杂。化学蛋白质组学技术，是利用化学探针，结合蛋白质组学，以小分子靶点发现、创新药物先导化合物筛选。而小分子Pull-Down实验是通过将小分子化合物标记（常用生物素标记，或固定在beads上），然后与细胞裂解液或蛋白样品共孵育，以捕获与小分子结合的靶蛋白，最后用WB（点对点）或者质谱高通量检测。

小分子Pull-Down的实验原理：生物素标记的小分子与蛋白裂解液充分孵育（有些项目中会分离特定的细胞器蛋白），使用溶剂（如DMSO）组作为阴性对照（部分文献会同时会使用非标记的等量的小分子化合物或游离生物素作为平行对照组）。然后链霉亲和素标记的磁珠特异性的捕获生物素分子，与小分子结合的蛋白会被同时亲和纯化洗脱，通过SDS-PAGE（或使用灵敏度更高的银染)检测不同组别的蛋白差异情况，最后质谱进行蛋白组学鉴定（或WB点对点验证）。

图1 基于生物素的小分子Pull-down实验原理（Hsu et al., 2022）。

服务内容及说明

适用范围

1、直接靶点鉴定；

2、靶点验证与互作确认；

3、相互作用组研究。

客户下单及项目信息填写

在我司官网http://www.biorun.com/进行注册或登录，请客户按照页面提示填写：

1、项目名称、选择项目类型、填写个人信息及联系方式进行预提交；

2、提交项目所需要的具体信息：细胞样本、目标蛋白及对应的一抗等。

实验信息

实验过程中客户可以随时登入管理系统查看项目实时进展情况。实验结题时系统会通过短信自动通知客户，并发送实验报告查看网址。实验结题后，实验报告，检测结果可在线查看或打印，并永久保留。

实验周期

致电详询。

实验交付内容 

1、蛋白的WB条带图；

2、完整的实验数据及实验报告。

我司案例

图2 小分子Pull-down验证ROCK2蛋白与小分子Cel互作。

参考文献

Hsu C C, Xu Z G, Lei J, et al. Identification of myo-inositol-binding proteins by using the biotin pull-down strategy in cultured cells[J]. STAR protocols, 2022, 3(2): 101385.