背景说明
外泌体(Exosomes)是指可以从各种细胞中分离并释放到细胞外的30-150nm的小囊泡,其内含物包括复杂的RNA、蛋白质、脂质等。目前,所有培养的细胞类型均可分泌外泌体,且外泌体天然存在于体液中,包括血液、唾液、尿液、脑脊液和乳汁等。外泌体被视为特异性分泌的膜泡,其广泛参与细胞间物质运输与信息传递,调控细胞生理活动;还具有抗原提呈、免疫逃逸、诱导正常细胞转化、促进肿瘤发生和转移等作用;此外,外泌体还可以作为“天然的纳米粒子”来进行药物递送。
目前差速超速离心是外泌体分离方法中公认的“金标准”,也是高分文章中首选的分离方法。分离之后,需进行从物理特征到表面分子标志物的一系列鉴定才能确定分离的是外泌体。
图 外泌体组成示意图(Ibrahim et al. 2016)。
常用外泌体鉴定方式
透射电镜鉴定
简称TEM,适合外泌体双层囊膜超微结构观察,通常为茶托型或一侧凹陷的半球形,是外泌体重要标志之一。
纳米颗粒跟踪分析
简称NTA,可保证外泌体原始状态,检测速度快,检测后提供外泌体粒径和浓度信息。
分子标志物检测
外泌体标志物包括四跨膜蛋白家族、细胞质蛋白、参与生物功能的分子以及细胞分泌的特异性蛋白等,可采用Western blot、免疫荧光、流式细胞术、qRT-PCR、高通量测序、质谱等多重手段进行检测。
外泌体标记或示踪
目前,常用的外泌体示踪方式为亲脂性染料标记,其中PKH67绿色荧光/PKH26红色荧光染料可与外泌体的脂质双层膜稳定结合,染色效果较好,应用较广泛;也可采用Di系列染料,如DiI(橙色荧光)、DiO(绿色荧光)、DiD(红色荧光)、DiR(深红色荧光)等,其中DiR可穿透细胞和组织,可用于活体示踪。
服务流程
客户在线下单——订单/实验材料确认——细胞培养——上清液收集——超速离心——外泌体收集——外泌体鉴定——出具实验报告
服务内容及说明
适用范围
目前,在各种健康与疾病模型中都发现,外泌体通过分子信息传递扮演着重要角色;此外,外泌体还越来越多地被认为是疾病的生物标志物和预后因子,具有重要的临床诊断和治疗意义。除此之外,它们还有潜力被用于临床,作为基因和药物递送的载体。
客户下单及项目信息填写
在我司官网http://www.biorun.com/进行注册或登录,请客户按照页面提示填写项目名称、选择项目类型、填写个人信息及联系方式,提交项目所需要的具体信息,包括:
1、细胞类型;
2、检测方式;
3、尽可能丰富的相关资料、文献。
实验信息
实验过程中客户可以随时登入管理系统查看项目实时进展情况。实验结题时系统会通过短信自动通知客户,并发送实验报告查看网址。实验结题后,实验报告、检测结果可在线查看或打印,并永久保留。
实验周期
致电详询
实验交付内容
1、所有实验的原始数据(包括实验过程、实验试剂与设备等);
2、鉴定报告与结果分析(TEM图片、NTA分析、标记物鉴定等);
3、高质量外泌体,干冰运输。
参考文献
Ibrahim A, Marbán E. Exosomes: Fundamental Biology and Roles in Cardiovascular Physiology. Annu Rev Physiol. 2016;78:67-83.