背景说明

CRISPR/Cas9系统是近年来广泛应用的基因编辑工具，其核心原理是通过sgRNA（单链向导RNA）引导Cas9核酸酶识别并切割与sgRNA互补的DNA序列，产生双链断裂（DSBs），进而通过细胞自身的DNA修复机制（如非同源末端连接NHEJ或同源重组HR）实现基因编辑。

然而，CRISPR技术存在一个关键局限：脱靶效应。即sgRNA可能与基因组中其他非靶标序列（与sgRNA存在部分同源性）结合，导致Cas9错误切割这些位点，引发非预期的基因突变。脱靶效应可能导致细胞功能异常、致癌风险增加等问题，尤其在临床基因治疗中，脱靶突变可能引发严重安全隐患。因此，精准检测脱靶位点是CRISPR技术临床转化和基础研究的核心需求。

全基因组无偏见鉴定双链断裂测序（genome-wide, unbiased identification of DSBs enabled by sequencing ，GUIDE-seq） 是目前细胞内全基因组鉴定基因编辑脱靶效应常用的测序方法。该方法的主要依据是细胞会通过非同源末端（NHEJ）的修复方式将短的双链DNA（double-stranded oligodeoxynucleotide，dsODN）随机整合到DNA双链断裂处，从而导致dsODN的插入。因此，在细胞中同时转染RNP混合物，和dsODN双链，若发生脱靶，则能够通过特异性引物扩增含有dsODN的基因组进行二代测序就可以判断Cas蛋白或者sgRNA的脱靶位点。

Guide-sep技术相对于SITE-seq技术，更加的精准，能够检测到0.03%的低频脱靶 ，也是行业内经典的，认可度较高的一种检测方式。

图1 GUIDE-seq检测原理示意图（Tsai et al., 2015）。

服务内容及说明

适用范围

1、评估新型编辑工具；

2、验证sgRNA特异性；

3、优化实验条件；

4、支撑治疗开发与安全评估。

客户下单及项目信息填写

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2、提交项目所需要的具体信息：细胞样本、靶基因等。

实验信息

实验过程中客户可以随时登入管理系统查看项目实时进展情况。实验结题时系统会通过短信自动通知客户，并发送实验报告查看网址。实验结题后，实验报告，检测结果可在线查看或打印，并永久保留。

实验周期

致电详询

实验交付内容

1、完整的实验数据及实验报告。

我司案例

我司测序分析脱靶位置98%可与文献结果互相对应，高度重合，且我司改进后的方法测序得到的数据量更大，鉴定到的脱靶位点更多。

图2 SIT4靶基因的GUIDE-seq脱靶分析实验结果。

参考文献

Tsai, S. Q. et al. GUIDE-seq enables genome-wide profiling of off-target cleavage by CRI SPR-Cas nucleases. Nat Biotechnol 33, 187–97 (2015).