背景说明
生物体内的蛋白质很少单独行使功能,蛋白质之间会形成复合物来发挥功能。因此,蛋白质间的相互作用是细胞中最基本的活动,被称为互作蛋白质组,互作蛋白质组分析是指在组学水平上对相互作用的蛋白质进行分析。
相互作用蛋白质组学是蛋白质组学主要研究内容中的一项,是指从整体水平上分析一个有机体、组织或细胞中的蛋白质相互作用(PPIs)。遗传信息的复制表达、各类物质的代谢、细胞信号转导,以及蛋白质自身的合成、转运、降解等等都与蛋白质相互作用有关。研究蛋白质的相互作用,可以让我们更准确的认识蛋白质的功能及其发挥功能的机制,并进一步认识生物体生命过程的调节方式及其机制。
通过LC-MS/MS技术对IP、Co-IP、Pull-down等技术得到样本中的蛋白混合物进行鉴定,可同时鉴定目的蛋白及其相互作用蛋白,从而构建蛋白质相互作用谱。该技术既适用于蛋白混合物的SDS-PAGE分离后经胶内酶解的质谱分析,也适用蛋白混合物溶液内液体酶解的质谱分析。
IP-MS(Immunoprecipitation-Mass Spectrometry)即免疫沉淀-质谱联用技术,其原理是以细胞内源性靶蛋白为诱饵,将靶蛋白抗体与细胞总蛋白进行孵育,促进免疫复合物的形成。随后加入能够与抗体结合的protein-A/G(预先结合固化在琼脂小球或磁珠上),形成“结合蛋白-靶蛋白-靶蛋白抗体-protein-A/G小珠”复合物,将复合物进行聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)以分离蛋白,然后进行液相色谱-质谱联用,对酶解后的肽段进行质谱分析,从而分析出与目的蛋白相互作用的未知蛋白。
服务流程
客户在线下单——订单/实验材料确认——蛋白提取——免疫沉淀——LC-MS/MS——数据分析——交付结果
服务内容及说明
适用范围
蛋白质相互作用谱鉴定。
实验流程
客户在线下单——订单/实验材料确认——亲和纯化——LC-MS/MS——数据分析——互作蛋白确认——交付结果
实验周期
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1、样品来源、含量、状态及其他基本信息;
2、尽可能丰富的相关资料、文献。
实验信息
实验过程中客户可以随时登入管理系统查看项目实时进展情况。实验结题时系统会通过短信自动通知客户,并发送实验报告查看网址。实验结题后,实验报告、检测结果可在线查看或打印,并永久保留。
实验交付内容
1、所有实验的原始数据(包括实验过程、实验试剂与设备等);
2、生物信息学分析内容包括:
(1)蛋白质全谱鉴定;
(2)蛋白质表达量差异分析;
(3)差异蛋白筛选;
(4)PCA分析、聚类分析。