背景说明

CRISPR/Cas9最初发现于细菌体内，该系统是继锌指核酸酶（ZFN）、转录激活因子样效应物核酸酶（TALEN）基因编辑技术后，推出的第三代基因编辑技术，短短几年内迅速风靡全球，成为现有基因编辑和基因修饰里灵活性最强、效率最高、成本最低的技术之一，是当今最主流的基因编辑系统，广泛用于多个物种的基因组编辑。

图 CRISPR/Cas9系统分子机制示意图（Janik et al., 2020）。

 利用CRISPR/Cas9技术在单个细胞上产生突变以建立新的细胞系即CRISPR介导的基因敲除克隆。这些克隆细胞系是探索蛋白质功能、分析敲除基因后的结果和研究生物试剂特异性的重要工具。

 利用CRISPR/Cas9系统实现基因敲除，有两种策略：（1）敲除绝大部分外显子，将编码靶基因的功能域全部敲除；（2）敲除个别外显子，造成移码突变。两种策略的利弊如下表所示。

我司敲除细胞系介绍

我司敲除载体大多采用商品化载体，部分载体为我司改造。我司可针对您的目的基因序列，分析序列的各项参数后，设计引物后扩增预期片段，连入原始载体骨架，得到重组载体。

我司结合多年基因敲除与细胞生物学经验，可根据不同需求，选择不同敲除细胞系构建，包括：多克隆瞬转细胞系、单克隆瞬转细胞系、多克隆稳转细胞系、单克隆稳转细胞系。

服务内容及说明

适用范围

疾病基础研究、药物靶点研发、抗体验证、疾病诊断与检测等。

客户下单及项目信息填写

在我司官网http://www.biorun.com/进行注册或登录，请客户按照页面提示填写：细胞名称、培养方式、转染要求、载体信息、抗性筛选等信息，细胞及载体可选自行提供或我司提供。

实验信息

实验过程中客户可以随时登入管理系统查看项目实时进展情况。实验结题时系统会通过短信自动通知客户，并发送实验报告查看网址。实验结题后，实验报告、检测结果可在线查看或打印，并永久保留。

实验周期

致电详询

实验交付内容

1、重组载体的图谱序列信息和注释信息；菌检电泳图；测序结果； 一份去内毒素质粒,质量1μg；一份大肠杆菌菌液1mL（25%甘油菌）；超过部分额外收费。

2、a. 稳转细胞株/系筛选出库细胞标准：一个T25/瓶，密度80%以上，状态照片采集10X，3张/株细胞；b. 基因敲除的一代测序原始结果数据及分析数据；T7E1验证体外编辑效率需额外收费（可选）；c. 病毒空载细胞株需额外收费可提供（可选）；

3、病毒包装的完整的质检报告，默认包含无菌检验、支原体、衣原体检测、qPCR滴度检测，其他如内毒素残留、BSA残留，需额外收费（可选）

4、完整的实验数据及实验报告。

5、所有实验材料免费保存1个月，继续保存请提前沟通，需额外收费，否则逾期自动清理。

文献示例

Janik E, Niemcewicz M, Ceremuga M, et al. Various Aspects of a Gene Editing System-CRISPR-Cas9. Int J Mol Sci. 2020;21(24):9604.