背景说明

在细胞生物学和生物医学研究领域，对蛋白质-蛋白质相互作用（PPI）的研究一直是一个重点和难点。传统的检测方法如免疫共沉淀、酵母双杂交等在灵敏度、特异性或空间分辨率等方面存在一定的局限性。

而邻位连接技术通过使用特异性的抗体来识别并结合目标蛋白，再通过带有一段寡聚脱氧核苷酸（单链DNA）的PLA探针识别一抗并与之结合；当两个目标蛋白靠近时，两个目标蛋白的PLA探针的DNA就会配对互补，然后在连接酶的作用下，PLA探针上的DNA片段被连接在一起，会形成环状结构，通过滚环扩增（RCA）产生可检测的信号。该方法依赖于亲和探针可对近距离（<40 nm）目标分子的进行识别，并将蛋白质检测转变为DNA核酸序列的检测来实现对特殊蛋白质的检测、定量及定位。

图1 PLA技术原理（Alam MS., 2018）。

服务内容及说明

适用范围

1、验证两种目标蛋白质在细胞内是否发生互作；

2、检测两种目标蛋白质在细胞发生互作的位置；

3、定量分析两种目标蛋白质互作的强弱。

客户下单及项目信息填写

在我司官网http://www.biorun.com/进行注册或登录，请客户按照页面提示填写：

1、项目名称、选择项目类型、填写个人信息及联系方式进行预提交；

2、提交项目所需要的具体信息：细胞样本、目标蛋白及对应的一抗等。

实验信息

实验过程中客户可以随时登入管理系统查看项目实时进展情况。实验结题时系统会通过短信自动通知客户，并发送实验报告查看网址。实验结题后，实验报告，检测结果可在线查看或打印，并永久保留。

实验周期

致电详询 

实验交付内容

1、细胞爬片、荧光显微镜或共聚焦显微镜拍照的照片；

2、完整的实验数据及实验报告。

案例展示

运用PLA技术发现在Jurkat细胞中的ZAP-70和TCR zeta蛋白互作，互作主要发生在细胞质中。如图2所示，DAPI为细胞核的染料，用于细胞核的定位；胚芽凝集素（WGA）作为一种细胞膜染料，用于细胞膜的定位；红色的亮点代表ZAP-70和TCR zeta蛋白互作产生的荧光。

图2 PLA技术检测ZAP-70和TCR zeta蛋白的互作情况（Alam MS., 2018）。

参考文献

Alam M S. Proximity ligation assay (PLA)[J]. Current protocols in immunology, 2018, 123(1): e58.