背景说明
细胞凋亡是细胞的一种程序性死亡，是生物体中普遍存在的现象。细胞凋亡过程中细胞核染色质的形态学改变可分为：凋亡Ⅰ期（pro-apoptosis nuclei），细胞核内染色质高度盘绕，出现许多称为气穴现象（cavitations）的空泡结构；凋亡Ⅱ期，细胞核内染色质高度凝聚、边缘化；凋亡Ⅲ期，细胞核裂解为碎块，产生凋亡小体。凋亡细胞体积变小，细胞质浓缩。
细胞凋亡检测有很多种方法：根据凋亡细胞固有的形态特征，利用光学显微镜、激光扫描共聚焦显微镜和透射电子显微镜等观察细胞形态；根据细胞凋亡过程中不同时期的变化检测是否发生凋亡，常见的有Caspase活性检测、Annexin V检测、线粒体膜电位检测、TUNEL检测等。细胞发生凋亡时，不同时期在不同区域（如细胞膜、细胞浆、线粒体、细胞核等）会发生不同的生理生化改变。因此，针对不同时期的细胞凋亡检测要采用不同的方法。
表1 不同凋亡时期检测方法的选择
我司常用的细胞凋亡检测方法有以下几种：
Annexin V/PI双染法的优点
1、简便、快速；
2、可准确区分活细胞、凋亡细胞和坏死细胞。
Annexin V/PI双染法的缺点
1、制备贴壁细胞样品时，容易因消化和吹打造成细胞额外损伤，从而夸大了实验结果，增加了数据变异度。
2、凋亡细胞的本底荧光或非特异染色的特性会增强，导致荧光飘移，导致定量不准。
TUNEL染色的优点
TUNEL是目前原位检测细胞凋亡最敏感、快速、特异的方法，已广泛用于生物、医学研究领域，其可在细胞凋亡发生早期，检测到DNA片段的产生，并可直接使用在组织切片上，观察细胞凋亡发生的位置，所以是目前为止广泛接受与使用的一种细胞凋亡分析方法；其适用范围广泛，包含各类贴壁细胞（一般可制备细胞爬片）、悬浮细胞（或细胞悬液）以及组织切片。
TUNEL染色的缺点
1、坏死细胞亦有DNA裂点形成，也可呈现TUNEL反应阳性，因而特异性较差；
2、TUNEL结合免疫组化（IHC）检测时，固定过程对检测的影响较大，切片的大小、薄厚会直接影响到固定效果，从而产生结果的差异。
Hoechst染色的优点
1、无需用DAB显色，它直接结合细胞的DNA，经过紫外光激发后发出蓝色荧光；
2、可进行活细胞染色；
3、操作简单、便捷。
Hoechst染色的缺点
1、荧光染料存在淬灭的问题，建议染色后尽量当天完成检测，活细胞或组织染色后需立即观察；
2、Hoechst染液对人体有害，需注意适当防护。
服务流程
Annexin V/PI双染法流程
客户在线下单——订单/实验材料确认——细胞培养——细胞处理——细胞收集——Annexin V孵育——PI孵育——流式细胞仪分析——出具实验报告——结果交付
TUNEL染色法流程
客户在线下单——订单/实验材料确认——样本制备（可选）——切片（仅限石蜡切片与冰冻切片）——TUNEL染色（可选荧光标记或生物素标记）——可选荧光显微镜拍照或后续DAB染色拍照——凋亡指数分析——出具实验报告——结果交付
Hoechst染色法流程
客户在线下单——订单/实验材料确认——细胞培养——细胞固定——Hoechst染液孵育——可选PI双染——荧光显微镜拍照（或流式细胞仪检测）——出具实验报告——结果交付
服务内容及说明
适用范围
检测外界刺激（如药物处理）对细胞的影响。
客户下单及项目信息填写
在我司官网http://www.biorun.com/进行注册或登录，请客户按照页面提示填写项目名称、选择项目类型、填写个人信息及联系方式，提交项目所需要的具体信息，包括：
1、样本类型、名称或数量；
2、检测方式、检测时间点；
3、尽可能丰富的相关资料、文献。
实验信息
实验过程中客户可以随时登入管理系统查看项目实时进展情况。实验结题时系统会通过短信自动通知客户，并发送实验报告查看网址。实验结题后，实验报告、检测结果可在线查看或打印，并永久保留。
实验周期
致电详询
实验交付内容
1、所有实验的原始数据（包括实验过程、耗材、实验试剂与设备等）；
2、检测报告与结果分析（可选流式细胞仪检测数据（限细胞水平）、荧光图、DAB染色图，以及结果统计分析等）；
3、包埋、染色片（限客户提供组织）。
文献示例
图 荧光显微镜拍摄TUNEL染色检测细胞凋亡情况（Bahmani et al., 2011）
参考文献
Bahmani P, Schellenberger E, Klohs J, et al. Visualization of cell death in mice with focal cerebral ischemia using fluorescent annexin A5, propidium iodide, and TUNEL staining. J Cereb Blood Flow Metab. 2011;31(5):1311-1320.
