背景说明

背景说明

在细胞生物学和生物医学研究领域,对蛋白质-蛋白质相互作用(PPI)的研究一直是一个重点和难点。传统的检测方法如免疫共沉淀、酵母双杂交等在灵敏度、特异性或空间分辨率等方面存在一定的局限性。

而邻位连接技术通过使用特异性的抗体来识别并结合目标蛋白,再通过带有一段寡聚脱氧核苷酸(单链DNA)的PLA探针识别一抗并与之结合;当两个目标蛋白靠近时,两个目标蛋白的PLA探针的DNA就会配对互补,然后在连接酶的作用下,PLA探针上的DNA片段被连接在一起,会形成环状结构,通过滚环扩增(RCA)产生可检测的信号。该方法依赖于亲和探针可对近距离(<40 nm)目标分子的进行识别,并将蛋白质检测转变为DNA核酸序列的检测来实现对特殊蛋白质的检测、定量及定位。

 

图1 PLA技术原理(Alam MS., 2018)。

服务流程

服务内容及说明

服务内容及说明

适用范围

1、验证两种目标蛋白质在细胞内是否发生互作;

2、检测两种目标蛋白质在细胞发生互作的位置;

3、定量分析两种目标蛋白质互作的强弱。

客户下单及项目信息填写

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1、项目名称、选择项目类型、填写个人信息及联系方式进行预提交;

2、提交项目所需要的具体信息:细胞样本、目标蛋白及对应的一抗等。

实验信息

实验过程中客户可以随时登入管理系统查看项目实时进展情况。实验结题时系统会通过短信自动通知客户,并发送实验报告查看网址。实验结题后,实验报告,检测结果可在线查看或打印,并永久保留。

实验周期

致电详询 

实验交付内容

1、细胞爬片、荧光显微镜或共聚焦显微镜拍照的照片;

2、完整的实验数据及实验报告。

文献示例

案例展示

运用PLA技术发现在Jurkat细胞中的ZAP-70和TCR zeta蛋白互作,互作主要发生在细胞质中。如图2所示,DAPI为细胞核的染料,用于细胞核的定位;胚芽凝集素(WGA)作为一种细胞膜染料,用于细胞膜的定位;红色的亮点代表ZAP-70和TCR zeta蛋白互作产生的荧光。

图2 PLA技术检测ZAP-70和TCR zeta蛋白的互作情况(Alam MS., 2018)。

 

参考文献

Alam M S. Proximity ligation assay (PLA)[J]. Current protocols in immunology, 2018, 123(1): e58.

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